Hücrede meydana gelen hasarlarda aynı zamanda bir korunma mekanizması olan apoptozda ortaya çıkan hasarlar nörolojik rahatsızlıklara, kansere ve organ yetmezliğine sebep olduğu bilinmekte ve bununla ilgili olarak mekanizmalar çalışılmaktadır. Hasarlı hücrelerde apoptoz azalımı kanserin ortaya çıkmasındaki en ayırt edici özelliklerden biridir. Apoptozu belirleyen önemli proteinlerin biri kaspaz-3 enzimidir. Kaspaz-3 aktive olduktan sonra proteinleri keserek işlevsiz hale getirir. Kaspaz proteinlerinin aktivasyonu hücrede indikatör olarak kullanılabilir. Bu hedef doğrultusunda hücrelerde apoptoz mekanizmasında rol oynayan kaspaz-3 aktivitesinin ışığa hassas genetikli olarak kodlanmış membran proteinleri ve floresan proteinler kullanılarak elde edilecek hibrit yapı ile gerçek zamanlı ölçümü için metot geliştirilmesi amaçlanmıştır. Mevcut yöntemler sadece kısa dalga boyunda çalıştıkları ve dinamik değişimleri düşük olduğu için in-vitro deneylerinde istenilen sonucu vermemektedir. Kaspaz aktivitesinin ölçülmesi için rodopsin proteininin N-terminali ile YFP C-terminali arasında Kaspaz-3 enzimine hassas zincir Asp-Glu-Val-Asp (DEVD) olacak şekilde yerleştirilecektir. Bu amaç doğrultusunda rodopsin proteini ile floresan proteini rekombinant DNA yöntemleri ile bir araya getirilmesi, floresan mikroskobisi ile rodopsin aktivitesine bakılması ve kaspaz enzim aktivitesinin gerçek zamanlı olarak tespit edilmesi planlanmıştır. Reaksiyonlara bağlı olarak rodopsin ile floresan protein arasında meydana gelen enerji transferinin azalmasına, floresan proteinden gelen sinyallerde ise artmaya sebep olması ile kaspaz etkisinin gerçek zamanlı tayini mümkün olacağı hipotezi test edilecektir. Kaspaz-3 sinyali önceki çalışmamızda göstermiş olduğumuz hücre izleme yöntemi ile takip edilecektir. Geliştirilen yöntemleri kullanarak apoptozun moleküler mekanizmasında oluşan hasarların nasıl farklı fenotipleri ortaya çıkardığı ve yapısal/fonksiyon bozukluklarının diğer apoptoz yolakları ile ilişkilendirilmesi hedeflenmektedir
Proje ile ilgili açıklama girilmemiştir.